多糖中糖組成測定的方法有很多,常用的方法是:
1) 氣相色譜法(GC):
但該方法需要衍生化才能使單糖揮發(fā)。氣相色譜法可以對單糖的組成進行高質(zhì)量的分析,特別是與質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS),
從而提供更好的分辨率和靈敏度。雖然質(zhì)譜法可以很容易地將碳水化合物與其他有機化合物區(qū)分開來,但由于衍生單糖的高重現(xiàn)性,通過火焰離子化檢測器(FID)定量被更頻繁地用于測量衍生單糖的數(shù)量。然而,為了量化單糖,必須確保衍生化是完全的,以避免分析糖的損失或降解。此外,一些單糖如糖醛酸很難衍生化,這在某些情況下阻礙了氣相色譜法的準確定量。該方法的另一個缺點是,同一單體可能呈現(xiàn)不同的衍生形式,從而呈現(xiàn)同一分子的多個光譜,使分析變得復(fù)雜。博睿糖生物免費提供柱前衍生化,數(shù)據(jù)穩(wěn)定,重復(fù)性好。
2) 高效液相色譜(HPLC)法
與GC相比,這節(jié)省了樣品制備的時間,因為不需要衍生化步驟。高效液相色譜根據(jù)分子的電荷和極性來分離。然而,就單糖組成而言,極性是實現(xiàn)分離的主要機制,這種方法降低了色譜分辨率,導(dǎo)致在處理復(fù)雜混合物時存在偏差。例如,兩種具有相似極性或結(jié)構(gòu)的不同化合物(木糖和半乳糖)可以因此被共洗脫。
3)高效陰離子交換色譜(HPAEC)
這種方法提供了最常見的單糖的高分辨率分析,不需要衍生化步驟。根據(jù)pKa的差異分離單糖。博睿糖生物提供的該方法中,涵蓋16種單糖標準品,包含酸性糖、中性糖、氨基糖。免費提供前處理過程,給出樣品中單糖組成,包括游離糖、結(jié)合糖。且該方法為博睿糖生物工程師的首推方法。
4)核磁共振方法確定單糖
基于核磁共振(NMR)系統(tǒng)的使用不同的方法已經(jīng)發(fā)展到多糖的定量。使用1H NMR可以識別和量化主要多糖的陰離子單體組成?;诨瘜W(xué)移位選擇性過濾和全相關(guān)光譜(CSSF-TOCSY)序列的其他核磁共振方法,即使是單體(葡萄糖)、二聚體(蔗糖)或三聚體(棉子糖),也可以在不經(jīng)過預(yù)處理的情況下,在水介質(zhì)中同時區(qū)分22種不同的糖類。這些方法雖然快速、靈敏、高效,但由于它們需要廣泛的分析設(shè)備和非常有經(jīng)驗的人員,因此仍然相當(dāng)昂貴和復(fù)雜。