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應(yīng)用：廣泛應(yīng)用于寡糖和多糖的結(jié)構(gòu)測(cè)定。

原理：該過程包括將多糖的單個(gè)組分糖衍生成部分甲基化的糖醇乙酸酯，并通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析和定量。

即：多糖樣品中所有游離羥基都被甲基化---甲基化的多糖用三氟乙酸水解---部分甲基化的單糖被NaBH4還原---乙酰化成PMAAs---通過正確識(shí)別部分甲基化的糖醇乙酸酯，可以確定每個(gè)組成糖的連接位置。

重點(diǎn)及難點(diǎn)：

  雖然這些方法已經(jīng)很好地建立起來了，但是這個(gè)過程有許多技術(shù)方面的問題，要想成功地進(jìn)行甲基化分析并正確地解釋所生成的數(shù)據(jù)，需要對(duì)細(xì)節(jié)的仔細(xì)關(guān)注和豐富的經(jīng)驗(yàn)。博睿糖生物在甲基化方面，已開發(fā)出了甲基化試劑盒，專供各種多糖使用。制備了全套甲基化試劑標(biāo)準(zhǔn)品，并開發(fā)出了博睿糖寡多糖甲基化糖苷鍵分析軟件，獲得計(jì)算機(jī)軟件著作權(quán)。針對(duì)中性糖、酸性糖以及氨基糖，均有一套完整、快速、精準(zhǔn)的甲基化操作和分析流程。

項(xiàng)目方案：

中性糖和酸性糖甲基化方案不同，所以甲基化項(xiàng)目開始之前，需要客戶明確樣品是否為中性糖或酸性糖（明確方法可參考單糖組成分析項(xiàng)目）。中性糖甲基化分析：指的是單糖組成分析不含有半乳糖醛酸，葡萄糖醛酸，甘露糖醛酸，古羅糖醛酸的多糖。酸性糖甲基化分析：單糖組成分析中半乳糖醛酸，葡萄糖醛酸，甘露糖醛酸，古羅糖醛酸總和大于10%的多糖?？蛻粜枰崆案嬷侵行蕴沁€是酸性糖。

方案一：

博睿糖甲基化試劑盒（貨號(hào)BRS050）?？蛻舾鶕?jù)說明書，可自行制備樣品。簡化甲基化實(shí)驗(yàn)試劑的復(fù)雜處理。

 方案二：

博睿糖數(shù)據(jù)庫一次性比對(duì)服務(wù)?？蛻艨蓪⒁呀?jīng)采集到的GCMS數(shù)據(jù)，與我公司的標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)圖庫進(jìn)行比對(duì)分析，快速確定糖苷鍵種類，準(zhǔn)確度完勝國外公共數(shù)據(jù)庫。

 方案三：

博睿糖甲基化技術(shù)服務(wù)。客戶可將樣品委托我司，進(jìn)行甲基化實(shí)驗(yàn)及分析，根據(jù)客戶提供的單糖數(shù)據(jù)進(jìn)行核對(duì)。給出糖苷鍵種類及比例。

方案四：

在甲基化之前需要進(jìn)行糖醛酸還原實(shí)驗(yàn)，工作量比是中性糖甲基化的2倍，由于含有大量的糖醛酸會(huì)影響甲基化試劑的親核取代反應(yīng)。一般采用博睿糖生物的糖醛酸還原儀進(jìn)行糖醛酸還原2-3周，最后離子色譜糖醛酸含量消失或者小于5%。均可以直接進(jìn)行甲基化分析。根據(jù)客戶提供的單糖數(shù)據(jù)進(jìn)行核對(duì)。給出糖苷鍵種類及比例。

用量：

中性糖甲基化方案：需要樣品量20-30mg凍干粉。

酸性糖甲基化方案：需要樣品量100-150mg凍干粉。

案例分析：

  多糖甲基化是解析單糖連接位置，也是最經(jīng)典的多糖高級(jí)結(jié)構(gòu)的分析方法。博睿糖生物采用博睿糖甲基化試劑盒，通過甲基化反應(yīng)，游離羥基被甲基化后水解單糖殘基，將水解單糖的剩余羥基乙酰化。通過氣相質(zhì)譜，根據(jù)博睿糖甲基化數(shù)據(jù)庫，結(jié)合NMR，分析單糖的位置和比例不同，推測(cè)此連接和重復(fù)結(jié)構(gòu)。